厚朴
发布时间：2018-06-09
厚朴
本品为木兰科植物厚朴Magnolia officinalis Rehd、et Wils。或凹叶厚朴Magnolia officinalis Rehd、et Wils.var.biloba Rehd．etWils．的干燥干皮、根皮及枝皮。4～6月剥取，根皮及枝皮直接阴干；干皮置沸水中微煮后，堆置阴湿处， “发汗”至内表面变紫褐色或棕褐色时，蒸软，取出，卷成筒状．干燥．
【处方用名】 厚朴、川厚朴、川朴、紫厚朴、姜厚朴、炒厚朴、制厚朴、炙厚朴
【规范方法】 厚朴 取药材，刮去粗皮，洗净，润透，切丝，晒干。
姜厚朴 取厚朴丝，加姜汁拌匀，润透，置锅内，用文火加热，炒干，取出，放凉。或取生姜切片，加水与厚朴同煮至汁水尽，取出厚朴，切丝，干燥。
每厚朴100kg，用生姜lOkg，或干姜3kg[1]。
【药典方法】 厚朴 刮去粗皮，洗净，润透，切丝，晒干。
本品为弯曲丝条状，断面纤维性，外表面黄棕色，内表深紫褐色。
姜厚扑 先将生姜洗净，捣烂，加水适量，压榨取汁，姜渣再加水适量重复压榨一次，合并汁液。
“姜汁” 如用干姜，捣碎后加水煎煮二次，合并，取汁。、
取厚朴丝，加姜汁拌匀，置锅内，用文火炒至姜汁被吸尽，或至规定的程度时，取出，晾干。
每100kg厚朴丝，用生姜10kg或干姜3kg。
本品为弯曲丝条状，断面纤维性，呈紫褐色。[2]
【成品性状】 厚朴 呈丝状，宽3～5mm，外表面棕褐色，灰褐色或紫褐色。内表面紫褐色或紫褐色，较平滑，切面颗粒性，有油性，有的可见多数小亮星，气香，味辛微苦。
姜厚朴 形如厚朴丝，色泽加深，稍具姜辣气味。
【鉴别】
1.外观鉴别 干皮 呈卷筒状或双卷筒状，长30～35cm，厚0.2～0.7cm，习称“简朴”；近根部的干皮一端展开如喇叭口，长13～25cm，厚0.3～0.8cm，习称“靴筒朴”。外表面灰棕色或灰褐色，粗糙，有时呈鳞片状，较易剥落，有明显椭圆形皮孔和纵皱纹，刮去粗皮者显黄棕色，内表面紫棕色或深紫褐色，较平滑，具细密纵纹，划之显油痕。质坚硬，不易折断，断面藕粒性，外层灰棕色，内层紫褐色或棕色，有油性，有的可见多数小亮星。气香，味辛辣，微苦。
根皮(根朴) 呈单筒状或不规则块片，有的弯曲似鸡肠，习称‘鸡肠朴”。质硬．较易折断，断面纤维性。
枝皮(枝朴) 呈单筒状，长10～20cm，厚0.1～0.2cm。质脆，易折断，断面纤维性。
2.显微鉴别 本品横切面；木栓层为10余列细胞；有的可见落皮层。皮层外侧有石细胞环带，油细胞及石细胞群。韧皮部射线宽1～3列细胞：纤维多数个成束；亦有油细胞散在。粉末棕色。纤维甚多，直径15～32μm，壁甚厚，有的呈波浪形或一边呈锯齿状，木化，孔沟不明显。石细胞类方形、椭圆形，卵圆形或不规则分枝状，直径11～65μm，有时可见层纹。油细胞椭圆形或类圆形，直径50～85μm，含黄棕色油状物。
3.理化鉴别[3]
称取经粗捣后的盐制饮片约2g，置试管内，加蒸馏水l 0ml ,超声提取30min，过滤，取滤液待测。同时按上述方法制取生药供试液，以作阴性对照。2%硝酸银乙醇溶液:取分析纯硝酸银2g加100m1分析纯无水乙醇溶解即得。
(1)金属钠焰色反应 取铂丝用盐酸湿润后蘸取供试液，在无色火焰中燃烧，火焰即显鲜黄色。
(2)沉淀法 直接滴加硝酸银液数滴于供试液表面上，数小时后，有银层出现，生药无此现象。
4.薄层色谱鉴别
4.1取本品粉末0.5g，加甲醇5ml，密塞，振摇30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液，另取厚朴酚与和厚朴酚对照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-甲醇(27:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％香草醛硫酸溶液，在100℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点[4，5，6，7，8，9，10，11]。
1.厚朴酚与和厚朴酚的混合对照品 2.润法样品 3.浸渍2h润软样品
4.浸渍3h润软样品 5.浸渍4h润软样品 6.浸泡样品 7.粗皮样品
4.2 取本品30g,加水30ml使溶解,用正丁醇萃取3次,30ml/次,合并正丁醇液,置水浴上蒸干,残渣加1ml甲醇使溶解,作为供试品溶液。另取厚朴对照药材1g,加甲醇5ml,超声处理10min,滤过,滤液作为对照药材溶液。另取缺厚朴的样品30g,同法制得缺厚朴的阴性对照品溶液。取上述3种溶液各10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚-丙酮(9∶1)为展开剂,展开,取出晾干,以碘蒸气显色。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。阴性对照无干扰。[12]
4.3取样品加硅藻土适量,拌匀,加甲醇15ｍｌ超声提取10min，过滤，甲醇液挥干,加甲醇1ｍｌ将残渣溶解,作为供试液。另取厚朴酚、和厚朴酚,分别用甲醇配成1ｍｇ/ｍｌ的溶液,作为对照品溶液。吸取上述供试液,对照品溶液及阴性对照液各4μｌ,2μｌ,2μｌ,4μｌ,分别点于同一用1%ＮａＯＨ制备的硅胶Ｇ薄层板上,以苯－ 醋酸乙酯(9∶1.5)展开。取出,晾干,喷以5%香草醛硫酸,100℃下5ｍｉｎ显色。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。阴性试验证明无干扰[13]。
4.4取样品10ｇ,加乙醚30ｍｌ冷浸过夜,再置水浴中加热回流30ｍｉｎ,滤过,滤液挥干,残渣加醋酸乙酯1ｍｌ使溶解,作为供试品。取厚朴酚、和厚朴酚对照品,加醋酸乙酯制成每1ｍｌ各含1ｍｇ的混合对照品溶液,再取缺厚朴阴性样品10ｇ,同法制成阴性样品溶液。吸取供试品和缺厚朴阴性样品溶液各4μｌ,混合对照品溶液2μｌ,分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上,以环己烷—丙酮—醋酸乙酯(10∶3∶0.5)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以1%的香草醋硫酸溶液,热风吹至斑点清晰,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上显相同的棕红和棕灰两个斑点,阴性样品没有这两个斑点。[14]
4.5样品5g,加乙醚30mL,超声处理15min,滤过,滤液挥干乙醚,残渣加醋酸乙酯1mL使溶解,作为供试品溶液。取厚朴酚、和厚朴酚对照品,分别加甲醇制成每1mL含1mg的溶液,作为对照品溶液。吸取供试品溶液与对照品溶液各4μL,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以石油醚(60～90℃)-醋酸乙酯-甲酸(85∶15∶2)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%香草醛硫酸溶液,于105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,与厚朴酚、和厚朴酚对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,缺厚朴及缺广藿香的阴性样品无干扰 [15]。
4.6聚酰胺色谱 分别精密称取上述各样品粗粉2ｇ,置圆底烧瓶中,加65%乙醇20ml回流提取120min,过滤。取滤液3ｍＬ于10ml量瓶中,加65%乙醇稀释至刻度,摇匀,作为样品溶液。另精密称取厚朴酚及和厚朴酚对照品适量,以65%的乙醇溶解,分别制成厚朴酚1ml含0.0360mg,和厚朴酚1ml含0.0328mg的溶液,即得对照品溶液。精密吸取上述供试品溶液和对照品溶液各10μＬ分别点于聚酰胺膜上,以苯－甲醇(9∶1)为展开剂展开,取出,晾干。然后,在紫外灯下254nm和365nm观察,并拍摄照片。供试品色谱中,在与对照品色谱相应位置上,显相同颜色的荧光斑点。[16]
5薄层光谱鉴别
5.1展开剂系统为苯-甲醇(9:1)，其余同3.1.1项。展开显色后，于254nm的紫外灯下检测，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点[17，18，19，20]
5.2展开剂系统为苯-甲醇(9:1)，其余同3.1.1项。展开显色后，于365nm的紫外灯下检测，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点[21]
5.3取本品2 0ml,用乙醚萃取3次，每次20m1,合并乙醚提取液，自然挥干，残渣加醋酸乙酯5m]使溶解，作为供试品溶液。另取厚朴对照药材0.5g,研细，加乙醚15ml,浸泡24min,滤过，挥去乙醚，加醋酸乙酯5ml使溶解，作为对照药材溶液。吸取供试品溶液10μl，对照药材溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷一丙酮(10 : 3)为展开剂，展距8cm，取出晾干。喷以5%香草醛硫酸溶液，热风吹至刚有斑点显色。置紫外光灯(365nm)下检视，供试品液与对照品液有两个相同的蓝色荧光斑交点。[22，23，24]
5.4取样品9g，加硅藻土5g，研匀，加氯仿l0ml，水浴上加热回流30min,滤过，滤液用2％氢氧化钠溶液提取3次，每次20m1，合并碱液，加盐酸调节pH1一2，用氯仿提取3次，每次20ml，合并氯仿液，水洗，氯仿液用无水硫酸钠脱水后，蒸干，残渣加醋酸乙酷0.5m1使溶解，作为供试品溶液。取厚朴空白样品同法制得厚朴空白对照液。另取厚朴酚及和厚朴酚对照品，加醋酸乙酯制成每1ml各含lmg的混合溶液，作为对照品溶液。吸取上述3种溶液各5μl，分别点于同一硅胶GF254,薄层板上，以环己烷一醋酸乙酯(3 :1)为展开剂，展开后晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，厚朴空白对照在此位置未见斑点。[25]
5.5称取样品2.5g，加甲醉5m1，放置12h，过滤，滤液为样品液。厚朴酚、和厚朴酚对照品加乙醇制成每毫升各含1mg的混合液，作为标准对照液。同法制备空白对照液，吸取样品液、空白对照液各20μl，标准对照液5μl，分别点于同一硅胶GF254板，以氯仿一苯一乙酸乙酯(5:4:1)展开剂展开。取出晾干，紫外灯下检视，样品液与和厚朴酚位置处显相同颜色的斑点。[26，27]
5.6取厚朴酚，和厚朴酚加甲醇制成各lmg/lml的混合溶液。取供试品20m1，加乙醚萃取三次，每次l0ml，合并乙醚液，水浴上挥去乙醚，残渣加醋酸乙醋0.5m1溶解，作为供试品溶液。同法制备空白对照液。展开剂：环己烷－醋酸乙酷－甲酸(9:2:0.3),展距约13cm，取出晾干，置于紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中与对照品厚朴酚、和厚朴酚在相应的位置上，厚朴酚为蓝紫色荧光，和厚朴酚为暗紫色荧光，而不含厚朴的空白溶液在与对照品相应的位置未见荧光。 [28]
5.7展开剂系统为苯-甲醇(27:1)，其余同3.1.1项。展开显色后，于254nm的紫外灯下检测，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点[29]
5.8展开剂系统为苯-甲醇(22:1)，其余同3.1.1项。展开显色后，于254nm的紫外灯下检测，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点[30]
6指纹图谱鉴别
6.1 HPLC指纹图谱
色谱条件Lichrospher 100 RP-18e色谱柱(4.6 mmx250 mm, 5 μm );流动相乙腈一水(63:37);流速1.ml/min,柱温为室温，检测波长294nm
供试品溶液制备精密称取样品0.1 g,定量加人甲醇5 mL，室温浸泡24 h，其间振摇6一7次，取上清液。用0.45μm的微孔滤膜过滤，取续滤液，备用。
对照品溶液的制备 精密称取厚朴酚、和厚朴酚对照品适量，加甲醇分别制成40μg/ml、24μg/ml的溶液，即得。
测定方法精密吸取供试品溶液2μl，注入高效液相色谱仪中，测定并记录色谱图。经研究，其色谱图具有明显的特征性。[31]
6.2 HPLC指纹图谱
样品粉碎，精密称取2g置具塞锥形瓶中，精密加人甲醇10 ml，摇匀，密塞，浸渍48 h,滤过，精密量取续滤液3 ml置10 ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45μm滤膜过滤，即得。精密称取厚朴酚与和厚朴酚对照品各1.5 mg,置10 ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
色谱条件:色谱柱:ODSWypersil (5 μm, 250 x4 mm);流动相:甲醇:水:乙酸(75:24.5:0.5);流速:0.8 ml/min;检测波长:254nm,在此条件下，测定湖北厚朴、凹叶厚朴指纹色谱图，有显著特征[32，33]。
6.3 DNA指纹图谱
植物DNA提取与纯化 测定总DNA分子量、总DNA溶液纯度及浓度，进行DAF扩增，并检测PCR扩增产物，分析数据。
测定总DNA溶液纯度及浓度：总DNA经琼脂糖凝胶电泳后位置对应于23000 by分子量标记附近，显示经纯化后各DNA样品的DNA纯度为1.8左右，得率皆大于40 ng/mg。得到的DNA模板能满足进一步实验要求。
DNA扩增结果使用7个上海生工公司合成的8碱基随机寡核昔酸链引物对10种总DNA样品进行DNA扩增指纹分析，共获得可以区分的片段2222条，其中多态性片段1912镶，占总数的86.05%。[34，35，36]
6.4TLCS-FPS指纹图谱
样品2g，用10ml甲醇泠浸提取，过滤，取滤液3ml用甲醇定容至10ml.取4mg标准品用甲醇定容至2ml。
色谱条件：展开剂，苯－甲醇（9：1）；点样量，2μl，显色剂：香草醛－浓硫酸；薄层扫描条件,参比波长330nm，检测波长295nm，反射锯齿扫描。
指纹图谱的建立：特征峰位59.8处为和厚朴酚，69.8处为厚朴酚。[37]
【含量测定】
1.高效液相色谱法测定厚朴酚与和厚朴酚含量
1.1色谱条件 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水(78:22)为流动相；检测波长为294nm。理论板数按厚朴酚峰计算应不低于3800。
精密称取厚朴酚、和厚朴酚对照品适量，加甲醇分别制成40μg/ml、24μg/ml的溶液，即得对照品溶液。取本品粉末（过三号筛）0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，摇匀，密塞，浸渍24小时，滤过，精密量取续滤液5ml，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得供试品溶液。分别精密吸取上述两种对照品溶液各4μl与供试品溶液3～5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。本品按干燥品计算，含厚朴酚(C18H18O2)与和厚朴酚 (C18H18O2) 的总量不得少于2.0 ％[4]
1.2 色谱条件：色谱柱ZorbaxEclipseXDB-C18(46mm×150mm,5μm);流动相:甲醇-水(73:27);检测波长:294nm;流速:1 00ml/min;柱温:30℃。
供试品溶液的制备与测定 取样品摇匀,精密量取5ml,置25ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,超声处理15min,放置至室温,摇匀,滤过,取续滤液用0 22μm的微孔滤膜滤过,作供试品溶液。取供试品溶液进样15μl测定,[38]。
1.3色谱条件 ＹＷＧ-Ｃ18分析柱(46mm×250mm,5μm),流动相:甲醇-水(75:25);检测波长:254nm;流速1.1ml·/min;柱温:室温。理论塔板数:大于10000。
取样品约5ｇ,精密称定,精密加入乙醇50ml,超声处理40min,取上清液离心后即为样品溶液.精密配制每1ml含厚朴酚0.26mg含和厚朴酚0.164mg的乙醇溶液,作为对照品溶液。精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μl,分别注入液相色谱仪。测定峰面积,计算。 [39]
1.4色谱条件 ThermoHypersilODS色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相甲醇-水(78∶22),检测波长294nm,流速1.0ml·min -1,进样量20μl,理论塔板数按厚朴酚峰计不小于3800。
精密称取和厚朴酚与厚朴酚标准品分别用甲醇溶解为0.19mg/ml、 0.27mg/ml的溶液为对照品溶液。精密称取胃甘胶囊内容物约0.4ｇ(约相当于厚朴0.21ｇ),精密加正己烷15ml,称重,超声20min,补加溶剂至原重,滤过,滤液挥干溶剂,残渣用甲醇溶解,转移至10ml容量瓶中,稀释至刻度摇匀。用微孔滤膜(0.45μm)滤过,弃去初滤液,取续滤液为供试品溶液。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定即得。[40，41]
1.5色谱条件 色谱柱: Waters反相Ｃ18柱;KromasilＣ18,流动相∶甲醇-- 0.1%三氟乙酸水(75∶25),检测波长293nm,柱温∶室温;理论塔板数按厚朴酚计算不低于3800。
精密称本品粉末0.5ｇ,加甲醇5ml,超声提取20min,离心,吸取上清液,沉淀加甲醇同上处理2次,合并上清液,滤过,滤纸用少量甲醇洗涤,洗涤液与滤液合并,定容至25ml,摇匀即得供试品溶液。精密称取厚朴酚对照品加甲醇溶解配成288μg/ml溶液,即得对照品溶液。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定即得。[42]
1.6色谱条件 ShimpackCLCODS柱(150mm×4.6mm,5μm)为色谱柱,乙腈-0.1%磷酸溶液(62∶38)为流动相,292nm作为检测波长,进样量为5μl。理论板数按厚朴酚计算,应不低于4000。精密称取厚朴酚与和厚朴酚对照品适量,加甲醇制成分别含30μｇ/ml和6.8μｇ/ml的混合溶液,作为对照品溶液。取本品约1ｇ,精密称定,精密加甲醇25ml,称重,超声提取20min,取出,称重,加甲醇补足损失的重量,滤过,取续滤液以微孔滤膜(0.45μm)滤过,续滤液作为供试品溶液。分别精密吸取对照品溶液5μl,供试品溶液5～10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。[43]
1.7色谱条件 色谱柱:Hypersil ODSC18(5m,150 mm×4.6mm)，柱温35℃;流动相:乙腈-水-冰醋酸(50：48：2)，流速0. 8 ml/ min;检测波长:294 nm;灵敏度0.08，进样量20μL。
取本品适量，研细，取5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中。精密加人甲醇50ml，密塞，称量，超声30 min，放冷，称定重量。用甲醇补重，摇匀，滤过。取续滤液作为供试品溶液。精密称取厚朴酚与和厚朴酚对照品适量，加甲醇制成含厚朴酚0.5600 g/L与和厚朴酚0.4144 g/L的混合溶液，作为对照品溶液。[44]
1.8色谱条件 色谱柱Phenomenex-C18(4.6mm×150mm);流动相:乙腈-水-冰醋酸(60∶40∶1);柱温:35℃;检测波长:254ｎｍ;流速:1.0ml/min,灵敏度:0.05ＡUFS。
精密量取本品1ml置于25ml量瓶中,用50%乙醇稀释至刻度,摇匀即得,作为样品供试品溶液。精密称取厚朴酚与和厚朴酚适量,加甲醇制成0.05mg/ml的对照品混合溶液。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定即得。[45]
1.9.色谱条件 色谱SinoChromODSBP(4.6mm×150mm);流动相:甲醇-乙腈-水(50∶20∶40),流速1.0ml/min;检测波长294nm;柱温为室温。
精密称取厚朴酚与和厚朴酚用甲醇溶解为1mg/ml、 0.6mg/ml的溶液为对照品溶液。取本品研细(过五号筛),精密称取2ｇ,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇25ml,密塞摇匀,浸泡15h,滤过,续滤液再经0.45μm的微孔滤膜滤过,滤液作为供试品溶液。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定即得。[46]
1.10.色谱条件 色谱柱:u-BondnpoxC18(3.9×300mm );流动相:乙腈-水(6:4)，使用前经减压抽滤脱气。流速:0.8m1 /min。检测波长:254nm。量程:0.1AUFS。纸速:0.2cm/min 。和厚朴酚标准品保留时间:6.80min ;厚朴酚标准品保留时问7.92min。数据处理定量方法：外标峰面积法。
精密称取恒重的厚朴酚与和厚朴酚用甲醇溶解为0.28mg/ml. 0.14mg/ml的溶液为对照品溶液。准确称取木香顺气丸粉末0.6230g,置l0ml容量瓶中，加甲醇至刻度，放入CSF一1A超声波发生器中振荡20min(40℃)，然后以0.45μｍ滤膜过滤，滤液为供试品溶液。[47]
1.11色谱条件 色谱柱:E.MerckLiChrospher100RP-18(250×4mm,5μm);流动相:甲醇(Ａ)-0.5%高氯酸(Ｂ);梯度洗脱:时间;0～18min～40min(stop),Ａ:Ｂ：80∶20～80∶20～85∶15,流速(ml/min):0.50～0.80～0.80;柱温:40℃;检测波长:254nm。理论板数按和厚朴酚计不低于12000。
精密称取大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄酸、厚朴酚、和厚朴酚对照品(80℃干燥至恒重)适量,分别加甲醇溶解,定容,制成单一对照品溶液(大黄素0.28mg/ml,芦荟大黄素0.24mg/ml,大黄酚0.11mg/ml,大黄酸0.60mg/ml,厚朴酚0.75mg/ml,和厚朴酚0.63mg/ml);分别精密吸取上述单一对照品溶液各1.00ml,置10ml容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得混合对照品溶液(大黄素0.028mg/ml,芦荟大黄素0.024mg/ml,大黄酚0.011mg/ml,大黄酸0.060mg/ml,厚朴酚0.075 mg/ml,和厚朴酚0.063 mg/ml)。取本品0.4g,精密称定,加水30ml、盐酸5 ml,摇匀,再加氯仿40 ml,水浴加热回流:1.5ｈ,取出,冷却,置分液漏斗中,取氯仿液,水液加氯仿提取3次,每次10 ml;合并氯仿液,加水20 ml洗涤1次,取氯仿液,蒸干,用甲醇溶解残渣,定容5 ml,摇匀,即得供试品溶液。样品测定 精密吸取样品20 ml,进样10μl,根据峰面积积分值计算含量。[48]
1.12 色谱条件 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;乙腈-2.5%醋酸(50∶50)为流动相;检测波长为294nm,流速为1 0ml/min,柱温为35℃。理论板数按厚朴酚计算应不低于5000。
精密称取经五氧化二磷干燥至恒重的厚朴酚、和厚朴酚对照品适量,加甲醇分别制成每1ml含厚朴酚0.172mg、和厚朴酚0.088mg的溶液,即得,对照品溶液。取本品1ｇ,精密称定,加甲醇50ml超声提取30min,滤过,滤液挥干,残渣加少量甲醇溶解,滤过,置于5ml容量瓶中,加甲醇至刻度,经0.45μm滤膜过滤,收集续滤液,即得供试品溶液。分别精密吸取对照品溶液10、20μｌ与供试品溶液20μｌ,按上述色谱条件测定,测得三批样品中厚朴酚、和厚朴酚的含量。[7]
1.13色谱条件色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶柱(Kromasil C18).4.6mmx250mm,5 Am;流动相:甲醇－水(8:2);流速:0.8 ml/min;检测波长:294nm;柱温:室温。
精密称取厚朴酚对照品11.31mg，置10 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为厚朴酚对照品储备液;精密称取和厚朴酚对照品11.88 mg，同法制得和厚朴酚对照品储备液。各浓度对照品溶液由此稀释制得对照品溶液。精密量取本品5 ml，加稀盐酸调pH至2一3，用氯仿振摇提取4次，每次10ml，合并氯仿液，蒸干，残渣用甲醇溶解并精密稀释至10 ml，摇匀，用微孔滤膜(0. 45μm )滤过，即得供试品溶液。同法制备阴性样品溶液，分别取20μl注入液相色谱仪，测定。[18]
1.14色谱条件 流动相甲醇－水(60∶40),流速1.2ml/min,检测波长295nm,柱温室温,分离度大于15,进样量10μｌ。
精密量取厚朴酚与和厚朴酚混合溶液(各含250μｇ/ml)适量,加无水乙醇稀释成各含50μｇ/ml的溶液,作为对照品溶液。精密量取藿香正气水1ml置25ml容量瓶中,以无水乙醇稀释至刻度,摇匀,干燥滤器过滤,弃去初滤液,续滤液用0 45μm滤膜过滤,得供试品溶液。分别吸取此溶液与对照品溶液,进样测定,外标一点法计算。[19]
1.15色谱条件 C18柱（250mm×4.6mm,5μm），流动相甲醇－乙腈－水(20∶15：9),流速0.9ml/min,检测波长294nm,柱温30℃,分离度大于15,进样量10μｌ。
样品处理：石油醚超声处理，甲醇定容。[49]
2．超临界流体萃取法—毛细管气相色谱法分析厚朴药材中厚朴酚、和厚朴酚的含量
色谱条件 交联石英毛细管柱（40m×0.53mm），固定相：ＳＥ-30，柱温：140℃（4min）以10℃·min-1升至240℃，保持5min，气化室：250℃，检测室：280℃，检测器：ＦＩＤ，载气：高纯氮气（流量以柱前压94ｋＰａ），并加尾吹Ｎ2（流量以压力300ｋＰａ）。42ＭＰａ作萃取压力。110℃为萃取温度。3ml为动态萃取体积。静态萃取时间为5min最佳。
精密称取本品粉末（过60目筛）0.2ｇ，装入萃取槽中，加氯仿0.8ml，以氯仿作吸收液，按上述最佳条件进行提取，然后加氯仿定容至10ml，即得供试品溶液。精密称取厚朴酚、和厚朴酚对照品适量，加氯仿分别制成1.346μｇ／μl、2.815μｇ／μl的溶液为对照品溶液。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1.0μl，注入气相色谱仪，测定即得。[50]
3．薄层色谱法
3.1单波长薄层扫描法测定厚朴酚、和厚朴酚的含量[51]
展开剂及扫描条件 展开剂氯仿-苯-醋酸乙酯(5∶4∶1)，λ=287nm,单波长反射法锯齿扫描,ＳＸ=7,狭缝2mm×2mm。
精密称取厚朴酚、和厚朴酚适量,加无水乙醇制成1mg/ml的溶液,作为对照品溶液。精密称取供试品10g,加硅藻±8ｇ,研匀,置索氏提取器内,加氯仿适量,回流提取4h,滤液用2%氢氧化钠液提取4次,每次25ml,合并碱液,加盐酸调ｐＨ值至1～2,用氯仿提取4次,每次25ml,合并氯仿液,适量水洗2次,蒸干氯仿液,用无水乙醇定量转移至10ml量瓶中,稀释至刻度,作为供试品溶液。精密吸取供试品.对照品溶液各2μｌ,点于同一硅胶Ｇ薄层板上,展开,定位,扫描测定。
3.2双波长薄层扫描法测定厚朴酚、和厚朴酚的含量[52，53]
扫描条件 波长:λs =285 nm, λR = 350 nm。
取样品内容物约3g，精密称定，置l00 ml圆底烧瓶中，加乙醇25 ml，热回流1h，放冷、滤过。滤液转入50 ml量瓶中，用乙醇洗涤残渣、烧瓶和滤器，滤过并人同一量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液;另取厚朴酚与和厚朴酚对照品，加乙醇制成0. 22 mg/ml、0.08 mg/ml的混合溶液作为对照品溶液。分别精密吸取供试品溶液6μl、对照品溶液4μl, 8μl，分别交叉点于同一硅胶GF254薄层板上，以苯-甲醇(9:1)为展开剂，展开，取出，晾干。
3.3色谱条件 定量用硅胶UF254高效薄层板;展开剂氯仿一苯-醋酸乙酯(5:4:1);上行展开14cm;双波长扫描:Xs = 285 nm, XK = 365 nm, SX = 7，反射法锯齿扫描，狭缝0.4mm X0.4 mm;对照品点样量2μl，供试品点样量4μl，外标一点法计算。
取厚朴酚对照品，加醋酸乙酯制成每1mL含0.65mg的溶液，作为对照品溶液。供试品溶液的制备精密量取本品10 ml,加人硅藻土11g,搅拌均匀，加乙醚60mL，用索氏提取器提取至无色，乙醚液水浴低温蒸干，醋酸乙酯定容至5 mL.作为供试品溶液。[8,54]
3.4薄层色谱-紫外分光光度法测定厚朴酚、和厚朴酚的含量[55]
分别精密称取厚朴酚、和厚朴酚对照品,加乙醇溶解并稀释成15.60μg/ml、10.44μg/ml的溶液,即得对照品溶液。称取痞满消冲剂约6g,研碎,精密称定,精密加入乙醇25ml,精密称重,水浴加热回流1h,放冷,称重,并加乙醇补足减失的重量,滤过,弃去初滤液,收集续滤液为供试品溶液。另取缺厚朴的阴性对照品约6g,同法制备,收集续滤液为厚朴阴性对照溶液。
精密量取供试品溶液及缺厚朴阴性对照溶液各100μl,分别点于同一硅胶GF254薄层板上,使成条状,在供试品条斑侧1.5cm处点厚朴酚及和厚朴酚的混合对照品溶液5μl作对照,以苯-甲醇(9∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(254nm)下检视,分别刮取与厚朴酚、和厚朴酚对照品相应位置上的条斑,置10ml离心管中精密加入乙醇10ml,搅拌10min,离心。取上清液作为对照品溶液;同时刮取阴性对照品位置上与供试品条斑等面积的硅胶GF254,置另一个10ml离心管中,各管均精密加入乙醇10ml,搅拌10min,离心。取上清液分别作为供试品溶液和阴性对照品溶液，在294nm处测定吸收度。
3.5聚酰胺薄层扫描法测定厚朴酚、和厚朴酚的含量[56]
扫描条件 在CS-9000薄层扫描仪上，参比波长λR =330nm，样品波长λs =295nm，线性参数SX=7，反射法锯齿扫描
取样品研碎，准确称取10g，置50m1烧瓶中，加乙酸乙酯25m1，回流提取1h，过滤。再以10ml乙酸乙酯洗涤残渣，合并浓缩后，定容至5m1，即得供试品溶液。准确称取厚朴酚.和厚朴酚对照品，以乙酸乙酯溶解为2μg/μl，得对照品溶液。
将样品液和对照品液分别点于同一块聚酰胺板上，以苯-甲醇(9 : 1)为展开剂，上行展开1 Ocm ,紫外灯下观察厚朴酚显蓝色荧光斑点，Rf值为0.71，和厚朴酚显暗紫色荧光斑点。Rf值为0.40。
3.6薄层层析条件:硅胶GF254薄层板以氯仿一环己烷一甲醇(1.5:3.5:1)为展开剂， UV(254 nm)下检视。扫描条件厚朴酚λs = 290 nm, λR=365nm;狭缝:0.4mmX0.4 mm;线性参数:sx=3;灵敏度:中均良好。
取样品内容物0.8g，精密称定，加乙醚50 ml超声处理20 min,滤过，滤液蒸干，残渣用甲醇2 ml溶解，摇匀，即得厚朴酚供试品溶液。精密称取厚朴酚对照品用甲醇制成1.03 mg/ml的对照品溶液。用定量点样毛细管吸厚朴酚供试品溶液2μl，厚朴酚对照品溶液2μl和3μl点于同一块硅胶GF254薄层板上，展开扫描，用外标二点法扫描。[57]
3.7色谱条件:吸附剂:高效硅胶GF254薄层板;展开剂:环己烷-丙酮(10∶3);上行展开,展距8cm;扫描条件:λs=290nm,λR=350nm,Sx=3,狭缝0.4×0.4mm,灵敏度中。
样品测定:取本品内容物2g,精密称定,精密加乙醇25ml,充分振摇后,超声处理30min,静置,离心,取上清液,作为供试品溶液。吸取供试品溶液4μl,对照溶液1μl和2μl,分别交叉点于同一薄层板上,依法测定,得供试品与对照品吸收度积分值,计算即得,[23]
4.气相色谱法测定厚朴酚与和厚朴酚含量[58]
色谱条件 CBP-1(25 mm×0.25 mmID)毛细管色谱柱;载气:氮气130 kPa (40
ml/min).氢气65 kPa,空气50 kPa;柱温:200℃(0 min)5℃/min 240℃(20 min);汽化室250℃;检测器280℃;分流进样，进样量:2.0μ1。在此条件下保留时间为:十六醇5.70 min.厚朴酚9.67
min，和厚朴酚11.83 min.
精密称取厚朴酚17.2 mg，和厚朴酚14.6mg，分别置于5 ml容量瓶，用乙酸乙酯定容为厚朴酚(M)标准液与和厚朴酚(H)标准液。分别准确移取1.50 ml厚朴酚(M)与和厚朴酚（H）标准液混合为C标准液；精密称取约0.1600g十六醇于100 ml容量瓶，用乙酸乙酯定容为D内标液。精密称取5.00g的“种因1号” 粉末于50 ml蒸馏瓶。用乙酸乙酯40.30.30 ml分别回流提取各30 min，过滤，合并滤液.蒸馏浓缩约10 ml.移人25 ml容量瓶，加人5. 0 ml内标液，乙酸乙酯定容，即得供试品溶液。
5气相色谱－质谱联用测定挥发油的含量
5.1 GC条件 HP5890Serise I气相色谱仪，色谱主Cross-Linked Methyl Silicone Gum Phase弹性石英柱（25m×0.2mm×0.3μm），柱温50℃（1min）4℃/min225℃(5min),进样方式：不分流进样，不分流周期0.6min，进样口温度250℃，监测器FID，250℃，HP3396A记录仪，载气He1ml/min;H2170kPa,Air270kPa。质谱条件：HP5988质谱仪，离子源温度200℃，接口温度280℃，扫描范围35～400amu。[59]
5.2色谱条件 色谱柱：SE-3050m×0.25mm，柱前压186kPa，进样量0.3～0.4μl，分流吡10:1,进样口温度265℃，柱温90℃～260℃，质谱条件：电子轰击源EI，分辨率1000，电子能量70eV，离子源温度200℃，扫描范围30～350m/z。[60]
【性味与归经】 苦、辛，温。归脾、胃、肺、大肠经。
【功能与主治】 燥湿消痰，下气除满。用于湿滞伤中，脘痞吐泻，食积气滞，腹胀便秘，痰饮喘咳。
【用法与用量】 3～9g。
【贮藏】 置通风干燥处。
参考文献
